膜片鉗是細胞膜離子通道電流檢測的重要工具。1976年Neher和Sakmann發(fā)明了膜片鉗技術(shù)。此后由于巨歐姆阻抗封接方法的確立和幾種方法的創(chuàng)建,1980年以來此技術(shù)已可用于很多細胞系的研究,目前,細胞膜離子通道的研究已經(jīng)應用到了各種疾病的診斷治療、藥物作用、環(huán)境對細胞膜離子通道的影響以及經(jīng)絡(luò)研究等多個領(lǐng)域,因此,作為其測量工具的膜片鉗技術(shù)也就得到了越來越多的重視,現(xiàn)在國內(nèi)外有多個單位在從事膜片鉗系統(tǒng)的開發(fā)與研究,其中包括德國HEKA公司生產(chǎn)的EPC系列、美國Axon公司生產(chǎn)的200B系列和國內(nèi)華中科技大學研發(fā)的PC-II型膜片儀等,這些產(chǎn)品基本上都是由前端模擬電路完成電流信號的采集、轉(zhuǎn)換和放大,在計算機上安裝數(shù)據(jù)采集卡實現(xiàn)信號的采集,并在PC機安裝專用的軟件實現(xiàn)快慢電容和串聯(lián)電阻補償?shù)恼{(diào)節(jié)以及采集到的電流信號的顯示。不過這些產(chǎn)品膜片鉗放大器部分的體積都比較大,價格也比較昂貴。一般在幾萬到幾十萬之間,更重要的是,由于模擬采集系統(tǒng)和PC機直接相連,所以PC機帶來的干擾非常大,對抗干擾性能的要求很高。
為了解決上述問題,筆者研究了一種基于單片機的小型化膜片鉗放大器,該膜片鉗放大器分為上位機和下位機兩個部分,下位機是一個以單片機為控制核心的采集系統(tǒng),可以單獨工作完成微電流信號的采集、放大、電容和電阻的補償以及波形的顯示和數(shù)據(jù)的存儲,另外下位機還可以和上位機進行通訊,這里的通訊是采用紅外傳輸方式實現(xiàn)的,用串口驅(qū)動紅外發(fā)射器實現(xiàn)上位機和下位機的通訊,上位機主要是對下位機傳輸?shù)男盘栠M行處理和分析。
本系統(tǒng)的控制核心是美國ADI公司的一款高性能數(shù)據(jù)采集與處理系統(tǒng)器件ADuC841。這款SoC具有高精度、高速度、高可靠性、大容量非易失性存儲的優(yōu)點,是一款性價比很高的單片機,可極大的簡化硬件電路設(shè)計、提高穩(wěn)定性、縮短開發(fā)時間、提高性價比、從而使系統(tǒng)具有操作方便、成本低、體積小、輸出波形穩(wěn)定性好、質(zhì)量高的特點。
2 系統(tǒng)結(jié)構(gòu)
為了實現(xiàn)信號的采集和顯示,系統(tǒng)具有以下幾個基本功能:
(1)離子通道電流的采集和放大;
(2)箝位電壓發(fā)生器;
(3)電阻電容補償;
(4)模擬信號到數(shù)字信號的轉(zhuǎn)換;
(5)友好的人機界面;
(6)系統(tǒng)和PC機的通訊。
為實現(xiàn)上述功能要求,系統(tǒng)主要分為微電流的采集和放大、箝位電壓發(fā)生器、電阻電容補償電路、ADuC841控制核心,液晶顯示及按鍵控制、系統(tǒng)和PC機之間通訊6個主要模塊。圖1給出了系統(tǒng)的功能框圖。
由圖1可知,經(jīng)過電極采到的離子通道電流信號經(jīng)過微電流采集和放大,同時進行電阻和電容的補償以后進入單片機的A/D轉(zhuǎn)換部分,把模擬信號數(shù)字化,采集到的信號同時送到液晶顯示器進行顯示,另外也可以實現(xiàn)采集信號的存儲和傳輸,按鍵模塊可以友好、方便的實現(xiàn)多種操作功能的控制。
3.1 控制模塊--單片機系統(tǒng)ADuC841
ADuC841內(nèi)部集成了8052微處理器的內(nèi)核,并提供了很大的存儲空間,如64KB的Flash/EEPROM程序空間、8KB的Flash/EEPROM數(shù)據(jù)空間、以及2304B的數(shù)據(jù)RAM等,此外,該器件還集成了許多外圍器件,包括精確、高速的8通道12位模數(shù)轉(zhuǎn)換器(其轉(zhuǎn)換速率最高可達420kS/s),15×10-6℃的精密內(nèi)部電壓參考源,DMA方式控制器,2個12位的電壓輸出數(shù)模轉(zhuǎn)換器、2個脈寬調(diào)制輸出、一個溫度傳感器使用這些模塊、可以方便地實現(xiàn)與前級傳感器的接口,也可以有效地控制后級電路。其他的片上外設(shè)主要有UART、SPI以及I2C接口、時間間隔計數(shù)器,看門狗定時器和電源監(jiān)視器等,這些模塊可以便捷地實現(xiàn)與其他單片機或PC機通訊(此時需電平轉(zhuǎn)換電路),還可以有效地保障單片機電源的正常工作和程序的正常運行。
圖2給出了ADuC841的功能方框圖,此外,ADuC841采用了1個時鐘周期一個指令的結(jié)構(gòu),大大地提高了程序的運行速度,減少了功耗,選用具有豐富資源的高性能單片機系統(tǒng)ADuC841作為控制核心,可以簡化教學系統(tǒng)硬件電路設(shè)計,降低成本,提高輸出波形的穩(wěn)定性和質(zhì)量,操作方便,編程簡易。
監(jiān)測細胞膜離子通道電流有電壓箝位和電流箝位兩種方法,筆者采用的是電壓箝位的方法,即在I-V轉(zhuǎn)換器的同相輸入端接入一個箝位電壓,把細胞膜電位箝制在一個固定的電壓值,這個電壓的幅值在幾十到幾百毫伏范圍內(nèi),脈沖時間10ms-50ms。圖3給出了箝位電壓發(fā)生器的電路,電路中采用555定時器構(gòu)成多諧振蕩的方式來實現(xiàn)方波, 555定時器直接產(chǎn)生的方波信號幅值接近電源電壓,而這里所用的箝位電壓應該是電壓幅值在幾百毫伏左右的信號,所以要對555定時器產(chǎn)生的信號幅度進行調(diào)節(jié),555定時器產(chǎn)生的方波信號經(jīng)過電阻R3和穩(wěn)壓管D1后,在D1兩端輸出穩(wěn)定的2.4V電壓,再在這個電壓兩端并聯(lián)一個電位器R4,從它的滑動端取出電壓作為箝位電壓,這樣即可對箝位電壓進行靈活地調(diào)節(jié),從而得到需要的幅度,產(chǎn)生的方波周期可通過調(diào)節(jié)電位器R2在14ms-154ms之間變化。
膜片鉗放大器最主要的部分是電流的采集、I-V轉(zhuǎn)換和放大以及各種補償電路,由于測量的是電流信號,所以要首先把電流轉(zhuǎn)換為電壓,由于細胞膜離子通道電流非常微弱,僅為幾個皮安,所以對電流電壓轉(zhuǎn)換部分所用放大器的性能要求比較高,要求它具有很高的輸入阻抗和很低的偏置電流,為滿足上面的要求,本文選用ADI公司生產(chǎn)的高精度、低功耗、滿擺幅放大器AD8627,它是單運放、具有極低的偏置電流(最大1pA);用5V-26V單電源供電或±2.5V-±13V電壓供電;最大失調(diào)電壓為500μV。圖4給出了電路的具體實現(xiàn)方法。
其中電極電位Vp是串聯(lián)電阻補償信號V1與修正后的控制電壓10Vc'之和經(jīng)過兩個電阻組成的1/10衰減電路實現(xiàn)的。A6輸出的電壓經(jīng)一個電位器后進入跟隨器。然后通過1pF的電容實現(xiàn)快電容補償,其中電位器可以實現(xiàn)補償?shù)恼{(diào)節(jié),使電路靈活方便,慢電容補償信號是Vc'經(jīng)過由A3、A4和A5組成的狀態(tài)變量環(huán)而獲得,預測注入電流在Rs上產(chǎn)生的誤差電壓V2也由狀態(tài)變量環(huán)得到,并與控制電壓Vc通過A2相加。由于正反饋的作用,由A2經(jīng)過狀態(tài)變量環(huán),產(chǎn)生與Vc相對應的過沖電壓Vc',從而實現(xiàn)超量充電作用,同時,慢電容的補償電路還實現(xiàn)串聯(lián)電阻誤差的預測,從電流檢測輸出端輸出的電壓經(jīng)A1后又經(jīng)過預測電路的同步調(diào)節(jié)實現(xiàn)了串聯(lián)電阻的補償,快電容和慢電容補償電路均示于圖5中,分別通過各自的電流注入電容器與電極入端相連。
本系統(tǒng)選擇北京青云公司生產(chǎn)的圖形液晶模塊LCM3202401,它具有320×320的點陣,采用SED1335作為控制器,可以實現(xiàn)圖形和本文兩種顯示方式,液晶模塊直接通過ADuC841進行控制,控制接口電路在圖6中給出。
液晶可以比較方便地實現(xiàn)文字和波形的顯示。文字顯示時用字模生成工具生成要顯示的文字字模,給定顯示區(qū)的首地址和光標的移動方式就可以方便地實現(xiàn)顯示。波形的顯示需要對數(shù)據(jù)進行變換和處理,由于液晶為320行,所以大量顯示的數(shù)字為320,因此首先要把采集的數(shù)據(jù)變換到該范圍內(nèi),并且顯示時還應對數(shù)據(jù)進行一些處理以及前后數(shù)據(jù)的比較才能實現(xiàn)完整波形的顯示。
3.5 按鍵模塊及菜單界面
快捷的按鍵、友好的菜單極大的方便了系統(tǒng)的操作,系統(tǒng)中提供了三個按鍵,對應于液晶顯示屏上的相關(guān)菜單,每一級菜單提供給使用者簡單的提示,方便使用,因而只需要在菜單的提示下按一鍵(有A、B、C三個鍵)便可以完成所需要的操作。
本系統(tǒng)采用的是獨立式按鍵,直接用I/O接口線構(gòu)成單個按鍵電路,每個按鍵單獨占有一根I/O接口線,且其工作狀態(tài)不會影響其他I/O接口線的工作狀態(tài),控制接口線分別用P1.2,P1.3和P1.4進行控制,按鍵輸入為高電平有效。
在使用過程當中,每個按鍵和液晶菜單相聯(lián)系,本系統(tǒng)目前設(shè)計是一個按鍵對應一個功能,進一步的設(shè)計將實現(xiàn)單一按鍵上實現(xiàn)不同的功能,這樣簡單的獨立式按鍵電路便不能滿足設(shè)計需要,必須使用軟按鍵輪詢技術(shù),軟按鍵輪詢技術(shù)是將菜單和按鍵組合在一起的用戶界面新技術(shù),該技術(shù)使得用戶可以在單一的功能鍵上進行多種選擇,也就是說,每個按鍵可以和一個命令菜單或參數(shù)菜單相聯(lián)系,用戶可以通過按合適的按鍵來選擇所需要的命令,也就是采用按鍵嵌套的方法來使同一按鍵實現(xiàn)不同的功能。
4 系統(tǒng)軟件設(shè)計
本系統(tǒng)軟件主要是完成單片機對前面得到的模擬信號的采集、存儲、原有數(shù)據(jù)的回放、系統(tǒng)和PC機的通訊并且控制液晶和按鍵實現(xiàn)人機交互、方便操作,軟件設(shè)計是整個膜片鉗放大器設(shè)計中十分重要的一環(huán),任務的調(diào)度,資源的分配,中斷的安排等都是軟件設(shè)計中應予以重視的環(huán)節(jié),為了達到性能的要求,并使程序具有良好的可維護性和可擴展性,系統(tǒng)軟件設(shè)計采用模塊化結(jié)構(gòu),主要分為測量模塊、打印模塊和無線傳輸模塊。圖7給出了系統(tǒng)的軟件流程圖,系統(tǒng)采用中文菜單友好用戶界面,便于操作。開機后首先對系統(tǒng)進行初始化,然后顯示主菜單,延時5秒后再顯示各功能菜單,功能菜單包括原有數(shù)據(jù)的回放、實時采樣顯示和紅外線傳輸三個部分。
5 結(jié)束語
本文設(shè)計的電路適用于微電流信號的采集、模擬電路部分使用低噪聲的AD8627實現(xiàn)電流電壓的轉(zhuǎn)換,后級的阻容補償電路等靈活地進行電阻和電容的補償,采用功能強大的ADuC841單片機作為整個系統(tǒng)的控制核心,數(shù)字部分的硬件電路必須簡潔,ADuC841有著豐富的外圍模塊,容易實現(xiàn)低頻數(shù)據(jù)信號的采集、處理,與液晶模塊配合后可以實現(xiàn)友好的人機交互功能。