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[導讀]由中科院北京基因組研究所與中科院半導體研究所承擔的“模塊化DNA分析系統(tǒng)”項目通過評審驗收。這標志著我國在第二代DNA測序儀研發(fā)方面,形成了具有自主知識產權的高通量DNA測序技術及其系統(tǒng)樣機。ABI PRISM 310型基

由中科院北京基因組研究所與中科院半導體研究所承擔的“模塊化DNA分析系統(tǒng)”項目通過評審驗收。這標志著我國在第二代DNA測序儀研發(fā)方面,形成了具有自主知識產權的高通量DNA測序技術及其系統(tǒng)樣機。

ABI PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺平板電泳,應用專利的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法),通過單引物PCR測序反應,生成的PCR產物則是相差1個堿基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物,使得四種熒光染料的測序 PCR產物可在一根毛細管內電泳,從而避免了泳道間遷移率差異的影響,大大提高了測序的精確度。由于分子大小不同,在毛細管電泳中的遷移率也不同,當其通過毛細管讀數(shù)窗口段時,激光檢測器窗口中的CCD(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測,激發(fā)的熒光經光柵分光,以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色的熒光,并在CCD攝影機上同步成像,分析軟件可自動將不同熒光轉變?yōu)镈NA序列,從而達到DNA測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等多種形式輸出。

DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型號。本實驗介紹的是ABI PRISM 310型DNA測序儀的測序原理和操作規(guī)程。

日前,驗收組對該項目進行了測試和驗收考核。驗收組認為,此項目完成了儀器研制項目實施方案所要求的各項技術指標,有效測序片段數(shù)量、平均讀長和有效序列數(shù)據(jù)總產量等關鍵技術性能指標遠遠優(yōu)于立項指標,該成果實現(xiàn)了與國際主流設備性能相當?shù)膰a化DNA測序能力,在基因組學、生物信息學,乃至生命科學諸多方向的基礎研究和應用研究方面具有重要實用價值。

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